1、空氣空白水空白：一般是用于儀器調零的,所有孔數值減掉該孔數值。

    2、底物空白：一般是用于防止底物弱顯色所造成的讀數偏高，同樣所有孔數值減掉該孔數值（只加底物和終止液）

    3、酶空白：一般在2步法實驗中使用，主要是看酶是否和板有非特異性結合的，一般不做這個 。

 

   ELISA空白孔一般設一個，這是為了減除顯色液的OD值。而陰性和陽性標準品是設2個復孔，雖然有點浪費，但為了確保實驗的可靠性，我認為還是很有必要的。ELISA空白孔加什么？一般兩個做法，看個人習慣或者說看你們實驗室的習慣：

    1、什么都不加，然后那個孔按照操作流程來做，這個說法的根據就是空白，也就是什么都沒有。

    2、加樣本稀釋液，然后按照操作流程來做。這個做法的根據就是只要不含陽性物質就算是空白的，加入樣本稀釋液的目的是為了使這個孔除了在沒有陽性物質上其他的都與其他孔一致。

 

   怎麼控制顯色時間？

    顯色時間要通過預實驗找到所測所有sample的顯色OD在0.1到2.0的有效range間，我用過OPD solution，一般incubation for 15min at RT，測一次然后立即加入stop solution 在測一次。